實(shi)驗名稱(cheng)：MTT檢測(ce)超聲激活血卟啉對SW-480細胞(bao)的殺傷作用

　　研究(jiu)方向：超聲醫療

　　測試目的：

　　自(zi)提出激(ji)光(guang)與(yu)血卟啉結合具(ju)有明顯的抗腫瘤(liu)效(xiao)應，PDT法在診治腫瘤方面已做了大量研究并在臨床中得到應用。但由于激光對組織穿透力較差，使PDT對深層腫瘤的治療受到限制。與激光相比，超聲是一種機械波，它對生物組織有較強的穿透力，并可無創傷地將聲能聚焦于深層組織。超聲可激活包括有機光敏(如血卟啉)在內的某些藥物，產生比單純超聲更加明顯的抗腫瘤效應。超聲結合光敏劑治療腫瘤的方法被稱為聲動力學療法（簡稱SDT）。迄今為止國內外學者(zhe)的研究多集中于單一介質中SDT法對腫瘤殺傷作用的探討。本文選擇體外培養的人結腸癌細胞SW-480，用不同頻率聚焦超聲激活血卟咻的方法處理不同介質中的腫瘤細胞，采用MTT法檢測細胞的損傷結果，為探討SDT的殺傷機理積累資料。

　　測(ce)試設備：ATA-8202功率放大器、換能器、照射水槽、溫度計、微型低速點擊、CO₂培養箱。

　　實(shi)驗過程：

　　待細胞長至對數期(qi)，消化細胞，分(fen)別用NaC1、PRMI1640、完全培養基(M)將細胞密度調至1X10⁶cells/mL。隨后，細胞(bao)分為四組：(1)對照(zhao)一組：細胞懸液，不(bu)進行超聲處理，(2)對照二組：加(jia)入血卟(bu)啉的細(xi)胞懸液，不進行超聲處理，37℃孵育30min，(3)實(shi)驗一組(zu)為單純超(chao)聲照(zhao)射(she)組(zu)。細胞直接進(jin)行超(chao)聲照(zhao)射(she)，(4)實驗二組為(wei)超聲+血卟(bu)啉(lin)組，細胞懸液中加入血卟(bu)啉(lin)(終(zhong)濃度為(wei)0.lmg/mL)，37C℃孵育30min，之后進行超聲照(zhao)射。聲照(zhao)頻率分別為(wei)1.1，1.6，2.3MHz；各頻率照(zhao)射(she)聲強均為1.5W/cm²。

　　超聲(sheng)處理后四組(zu)細胞(bao)分別接種于96孔板中，每個處理設4-5個復孔，每孔接種0.lmL細胞懸液及0.01mLMTT溶液。以上操作均在避光條件下進行。接種后的96孔板于CO₂孵箱中孵育4h后，離心25分鐘(4000rpm)，吸棄上(shang)清，每孔加0.2mLDMSO(分析純)，酶標儀檢測光吸收值(A值)，計算相對存活率(實驗組A值/對照組A值)。

　　各實驗組所(suo)得數據列表如下：表1、表2、表3分別顯示在NaC1溶液、PRMI1640、完全培養基中SW-480細胞經1.1，1.6，2.3MHz，1.5W/cm²超聲輻照后MTT解育4小時后細胞的相對存活率，圖1顯示SW-480細胞在不同溶液中經2.3MHz，1.5W/cm²超(chao)聲(sheng)輻(fu)照后MTT解育4h后的細胞相對存活率，表4顯示在Nac1、PRMI1640、完全培養基(ji)中SW-480細胞經23.MHz，1.5W/cm²超聲輻照12h后MTT解育4h后細胞的相對存活率。

　　實驗結(jie)果：

當(dang)聲照強度為1.5W/cm²時，在2.3MHz頻率(lv)的單純超聲照射下(xia)，SW-480細胞在NaCI溶液和完全培養基中細胞的相對存活率都接近100%，在PRMI1640溶液中，細胞的相對存活率達120%，說明2.3MHz頻率的單純超聲照射(she)對(dui)SW-480細胞幾乎沒有殺傷作用，反而有輕微的促生長作用。而在以上三種溶液中，發現在2.3MHz頻(pin)率下(xia)超聲+血卟啉照射使SW-480細胞的死亡率明顯增加，經t檢驗，A，B兩組的結果之間存(cun)在極(ji)顯著性差異(p＜0.01)，這表明在相同(tong)聲(sheng)照強(qiang)度和(he)頻率下加入血卟啉(lin)可(ke)以增強超聲對細(xi)胞的(de)殺傷(shang)效(xiao)果(guo)。實驗結果(guo)還顯示：當聲(sheng)照強(qiang)度為1.5W/cm²，在1.1MHz、1.6MHz頻率超聲照射下，在三種溶液中(1.6MHz頻率，PRMI640溶液中除外，其A組與B組數值之間有顯著差異，但無極顯著差異，經t檢驗，其p＜0.05。)A組(zu)(zu)與B組(zu)(zu)數值之(zhi)間無顯著(zhu)差異，經(jing)t檢驗，其p>0.05，這表(biao)明(ming)在1.1MHz、1.6MHz，聲(sheng)強為1.5W/cm²下加(jia)入血卟啉(lin)不能增強超聲對SW-480細胞的殺傷效果。表1-3和圖1的實驗結果還顯示：聲照強(qiang)度(du)為1.5W/cm²時，同一頻率下(xia)，針(zhen)對30~120秒內聲照時間對SW-480細胞的相對存活率無明顯影響。

圖1溶液照射四小時后的相對存活率

表1在不同溶液超聲照射12h后的相對存活率

表2在不同頻率超聲波照射4h后的相對存活率

　　安泰ATA-8202射頻功率放大器：

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